梅奧診所研究人員發現，多發性骨髓瘤新藥LCL161可刺激人體免疫系統，導致多發性骨髓瘤患者的腫瘤縮小。這些研究結果發表在《自然·醫學》雜志上。  多發性骨髓瘤是一種血液癌，它能影響血液的白細胞和血漿細胞，正常情況下兩種細胞都能產生抗體，可以抵抗感染。癌細胞在生長時不會產生有用的抗體，而是分泌大量單一抗體，積累在體內導致腎臟病變和感染。  在這項研究中，研究25位多發性骨髓瘤患者的主要研究員，同時也是梅奧診所生物化學家的瑪爾塔•凱西博士說：“LCL161藥物最初被開發是用于促進腫瘤死亡。然而，我們發現藥物不能直接殺死腫瘤細胞，而是使免疫系統更加突出，然后免疫系統將腫瘤細胞識別為外來入侵者并消除它們。梅奧診所的研究人員將結合免疫檢測點抑制劑對LCL161藥物進行后續臨床試驗，已經廣泛地應用于許多腫瘤治療中，用來評估LCL161是否能代替新治療選擇。  凱西博士說:“臨床前的研究模型是在十年前發展起來的，主要是為了精確地預測哪一種藥物能夠應用到臨床治療，而且還能幫助多發性骨髓瘤患者考慮哪些實驗治療劑是最好的。這項研究強調了研究藥物對在培養板上的腫瘤細胞的影響重要性，而且還研究了腫瘤細胞與自身微環境的相互作用的重要性，研究發現表明LCL161藥物對多發性骨髓有活性抑制，而且類似的藥物比之前的藥物可能具有更廣泛的臨床活性。
LCL161的生物活性      體外      LCL161 以劑量依賴性方式顯示Hep3B（IC 50 =10.23μM）和PLC5（IC 50 =19.19μM）細胞中的抗增殖作用并顯著降低細胞活力。LCL161以劑量依賴性方式在兩種敏感細胞系中顯著誘導凋亡。從非常低的濃度開始，LCL161顯著下調cIAP1的表達。低濃度的LCL161在濃度為0.5 nM時開始抑制cIAP1 [2]。LCL161是一種小分子口服IAP拮抗劑，用于與細胞毒性劑聯合使用。在體外研究了LCL161對CYP3A4 / 5（CYP3A）活性的影響。人肝微粒體的結果表明，LCL161以濃度和時間依賴性方式抑制CYP3A（K I為0.797μM，K inact為0.0803min -1）。LCL161在報告基因測定中激活人PXR并在人肝細胞中誘導CYP3A4 mRNA高達~5倍。      在體內      攜帶腫瘤的小鼠用載體或LCL161 po以50mg / kg /天的劑量或SC-2001 po以10mg / kg /天的劑量，每周5天，或組合持續治療，持續時間為50mg / kg /天。研究。通過與SC2001和LCL161共同處理顯著抑制腫瘤生長，并且在研究結束時，共處理組中的腫瘤大小僅為對照組的三分之一。LCL161是一流的口服Smac模擬物，顯示在小鼠異種移植模型中誘導cIAP1的降解和胱天蛋白酶3的裂解      LCL161的實驗參考方法      激酶測定      使用探針反應，咪達唑侖-1'-羥基化和睪酮6β-羥基化來評估CYP3A活性。對于可逆抑制，孵育（37°C，10分鐘）由（最終濃度）組成：磷酸鉀緩沖液（100 mM，pH 7.4），β-NADPH（1 mM），氯化鎂（5 mM），微粒體蛋白（ 0.025 mg / mL），探針底物（1μM咪達唑侖或25μM睪酮），LCL161（0,0.5,1,5,10,25,50或100μM）和有機溶劑（0.2％乙腈用于咪達唑侖，0.2％甲醇用于睪酮）。預孵育3分鐘后，通過加入β-NADPH引發反應，并通過加入乙腈（兩個體積）終止反應。先前顯示反應與時間和蛋白質濃度呈線性關系（結果未顯示），咪達唑侖和睪酮轉換分別為8.7±1.3％（n = 3）和2.6±0.20％      MCE尚未獨立確認這些方法的準確性。它們僅供參考。      細胞分析      將細胞（3×10 4活細胞/孔）鋪板于96孔透明底白板中，并將板在37（5％CO 2）下孵育~24小時。/ 95％空氣）在加濕培養箱中。然后用各種濃度（0.5,1,2.5,5,10,25或50μM）的LCL161，陽性對照，利福平（RIF）或媒介物對照（0.1％DMSO）處理細胞（6個重復孔）。 Puracyp劑量培養基中24小時的最終濃度。孵育期后，用PBS洗滌細胞，裂解并根據供應商的說明添加熒光素酶底物。將每個孔的等分試樣轉移到黑色96孔板的相同孔中。用TopCount NXT微孔板閃爍和發光計數器測量每個孔的發光。細胞活力是通過使用CellTiter-GLO細胞的ATP含量測量經過相同處理的PXR -報道基因測定板分離板測量?發光細胞活力檢測試劑盒。所有治療的細胞活力> 80％      MCE尚未獨立確認這些方法的準確性。它們僅供參考。      動物管理局      小鼠使用      雄性NCr無胸腺裸鼠（5-7周齡）。將每只小鼠皮下接種于背側，將1×10 6個 Huh-7細胞懸浮于0.1mL含有50％基質膠的無血清培養基中。當腫瘤達到200-300mm 3時，小鼠每天一次接受LCL161（50mg / kg）或SC-2001（10mg / kg）po，或LCL161和SC-2001的組合?？刂平邮哲囕v。使用卡尺每周測量腫瘤，并使用以下標準公式計算它們的體積：寬度2 ×長度×0.52。LCL161是一流的口服Smac模擬物，顯示在小鼠異種移植模型中誘導cIAP1的降解和胱天蛋白酶3的切割。      大鼠      LCL161口服給藥，每周一次，每次21天，起始劑量為10mg（通過使用在10％大鼠中引起嚴重毒性的十分之一劑量并轉化為人等效劑量計算）。在MDA-MB-231三陰性乳腺癌異種移植模型中，每周一次和每日兩次LCL161給藥同樣有效。每周一次耐受性更好，體重減輕。